Валидация биоаналитических методик проводится в соответствии с Руководством по валидации биоаналитических методов EMEA/CHMP/EWP/192217/2009, рекомендациями FDA Bioanalytical Method Validation (2013), а также с учётом Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза (согласно решению Совета Евразийской экономической комиссии «Об утверждении Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза»)

Валидация аналитической методики проводится по следующим основным параметрам:

• селективность (selectivity)
• оценка нижнего предела количественного определения, НПКО (lower limit of quantitation, LLOQ)
• линейность (linearity)
• правильность (accuracy)
• прецизионность (precision)
• эффект переноса (carry-over)
• эффект матрицы (matrix effect)
• степень извлечения (recovery)
• тест на разведение (dilution integrity)
• оценка минимальных откликов аналита и внутреннего стандарта (minimal values of analyte and IS response)
• стабильность (stability)
• обратная конверсия метаболитов (back-conversion of metabolites), если применимо.

Разработка и валидация аналитической методики проводятся специалистами ТОО «Биотехнология» индивидуально в рамках каждого исследования.

Особое внимание уделяется таким параметрам аналитической методики, как:

• оптимальный метод пробоподготовки: осаждение белка (protein precipitation), твердофазная экстракция (solid phase extraction), жидкость-жидкостная экстракция (liquid-liquid extraction) в зависимости от целевого диапазона концентраций и физико-химических свойств аналитов
• выбор хроматографических колонок и компонентов подвижной фазы, обеспечивающих наилучшие аналитические характеристики (чувствительность, селективность, линейность и др.), включая устойчивость методики в условиях её продолжительного применения при анализе большого количества проб; предпочтение отдаётся двумерным хроматографическим методам
• выбор условий детектирования: тип ионизации (ионизация электрораспылением с термофокусировкой – ESI, химическая ионизация при атмосферном давлении – APCI, сдвоенная система ионизации DUIS); выбор MRM-переходов, обеспечивающих наилучшую чувствительность и селективность методики
• оценка эффекта компонентов биологической матрицы на эффективность ионизации определяемого вещества, возможность минимизации эффекта матрицы
• выбор внутреннего стандарта, обеспечивающего максимальную точность количественной оценки; предпочтение отдаётся стабильным изотопно-меченым внутренним стандартам, идентичным по физико-химическим свойствам определяемому веществу, и имеющим отличия от него только по масс-спектру
• если в ходе биотрансформации определяемого вещества образуются метаболиты, способные к обратной конверсии в исходное соединение при хранении проб или при выполнении аналитических процедур (глюкурониды, N-оксиды, лактоны и др.), принимаются специальные меры для минимизации обратной конверсии и устранения влияния данного процесса на получаемые результаты
• оценка стабильности определяемого вещества в биологической матрице и растворах; выполнение тестов на стабильность аналита в биологической матрице (краткосрочная стабильность, долгосрочная стабильность в двух температурных режимах: не выше -20°С и не выше -70°С, стабильность при замораживании – размораживании) является обязательным до начала клинической части исследования; в случае выявления нестабильности определяемого вещества проводится разработка методики стабилизации и выбор специальных условий выполнения аналитических процедур и хранения образцов
• при исследовании комбинированных лекарственных форм проводятся отдельные валидационные тесты по влиянию на получаемые результаты совместного присутствия нескольких веществ в анализируемых образцах.